Un método científico para cuantificar el NMN en muestras biológicas
1. Introducción
Suplementación demononucleótido de nicotinamida (NMN)para regular al alza el nivel de nicotinamida y adenina dinucleótido (NAD+) se ha revelado como una prometedora intervención antienvejecimiento. Sin embargo, sigue siendo un serio desafío cuantificar con precisión los intermedios de NAD+,NMNen particular. Este estudio tiene como objetivo introducir un método novedoso, la metodología LC-MS/MS mediada por isótopos dobles (dimeLC-MS/MS), para la cuantificación precisa deNMNen muestras biológicas.
2. Factores que afectan a la detección precisa de NMN
El NMN es difícil de detectar con precisión debido a su vulnerabilidad a la degradación enzimática, la conversión en el procesamiento de muestras, sus comportamientos complejos en diferentes condiciones de columna y extracción, así como el efecto de matriz.
En concreto, el NMN tiene las propiedades de alta polaridad y baja volatilidad, que es fácil de disolver en agua pero difícil de disolver en disolventes orgánicos. Estas propiedades restringen en gran medida la aplicación de muchos métodos de análisis cuantitativo convencionales.
Bmuestras iológicascomola sangre transporta actividades significativas de CD38 y CD73 (ecto-5’-nucleotidasa), los cuales podrían usar NMN como sustrato.
El comportamiento del NMN en la columna es muy complejo, probablemente debido a la naturaleza bipartita de sus cargas, por lo que las sutiles diferencias en las condiciones de extracción y columna afectan significativamente a la detección fiable y precisa del NMN.
3. Estrategias de afrontamiento dedimeLC-MS/MSpara reducir el impacto de los factores de impacto
Para evitar la interferencia de los factores mencionados anteriormente, se aplica una columna prototipo NMN-2. Esta columna contiene partículas de sílice de alta pureza a base de C18 que son más capaces de unirse a compuestos hidrófilos que las partículas de carbono, lo que mejora la capacidad de separación.
Se emplea ácido perclórico (PCA) porque puede extraer eficientemente NAD+ y NMN de muestras biológicas como el plasma con pérdidas mínimas.
Para ajustar los efectos de la matriz, se agrega una cantidad fija (1 μM) de cada compuesto isotópico a las muestras biológicas antes de la extracción de PCA.
4. La ventajasde dimeLC-MS/MS
Los patrones de NMN isotópicos dobles, NMN (M + 14) y NMN (M + 5), en la metodología basada en LC-MS/MS pueden rastrear con precisión el destino del NMN durante el procesamiento de la muestra, lo que aumenta significativamente la precisión y la fiabilidad de la medición de NMN en muestras biológicas. Además, dimeLC-MS/MS puede evaluar la eficiencia de extracción y las concentraciones absolutas de NMN en diferentes tipos de muestras biológicas.
5. Conclusión
Ésimoesnuevo LC-MS/MS-La metodología impulsada con patrones de NMN isotópicos dobles puede medir de forma precisa y fiable el NMN en muestras biológicas.Se puede utilizar para futuros estudios sobre la ingesta de NMN.
6. Referencia
Unno, Junya et al. "Cuantificación absoluta del mononucleótido de nicotinamida en muestras biológicas mediante cromatografía líquida mediada por isótopos dobles-espectrometría de masas en tándem (dimeLC-MS / MS)". npj envejecimiento vol. 10,1 2. 2 de enero de 2024, doi:10.1038/s41514-023-00133-1
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