Mimoriadne výhody ultrasenzitívneho testu ELISA s cyklovaním tio-NAD pri určovaní proteínu NS1 horúčky dengue

1. Úvod

Horúčka dengue je akútne infekčné ochorenie spôsobenéVírus horúčky dengueuhryznutím infikovaného druhu Aedes (Ae. aegypti alebo Ae. albopictus) komára,s hlavnými príznakmi, ako je vysoká horúčka, závraty, bolesť hlavy, vyrážka aSilnábolesti (bolesti očí, svalov, kĺbov alebo kostí) atď. Toto ochorenie je široko rozšírené v tropickom a subtropickom podnebí. Odhaduje sa, že každý rok sa nakazí 100 až 400 miliónov ľudí, pričom viac ako 80 % je zvyčajne miernych a asymptomatických. Ťažká horúčka dengue však môže zvýšiť riziko úmrtia, ak sa nelieči správne. Včasná diagnóza tohto ochorenia je teda dôležitá pre jeho včasnú liečbu.

Je pozoruhodné, že neštrukturálny proteín 1 (NS1), vysoko konzervovaný glykoproteín, sa vylučuje hlavne počas infekcieDenguevírus, ktorý sa intenzívne považuje za hlavný faktor patogenézyHorúčka dengue. Preto sa NSI vo všeobecnosti používa ako biomarker na včasné odhalenie tohto ochorenia.

V tejto štúdii sendvičový enzýmový imunosorbentný test(ELISA)v kombinácii stio nikotínamid adenín dinukleotid (tio-NAD/S-NAD)Cyklistická metóda (ďalej len ultrasenzitívna ELISA) sa používa na detekciu NSI, po ktorej nasleduje porovnanie s NAAT na potvrdenie jeho presnosti detekcie.

2. Výhody a nevýhody tradičných metód detekcie preHorúčka dengue 

V súčasnosti saTu sú štyri hlavné metódy detekcieza Horúčka dengue.


Izolácia a identifikácia vírusu majú vysokú špecifickosť, ale sú časovo náročné a trvajú najmenej 5 dní. Rýchly antigénový test je najrýchlejší a nákladovo najefektívnejší spomedzi ostatných metód, ale citlivosť a špecifickosť sú relatívne nízke. Sérologický test založený na IgM a IgG je obmedzený počtom dní infekcie, pretožetátest sa musí odložiť, kým hladina protilátok nestúpne na zistiteľnú úroveň.

Na klinike sa NAAT často používa na určenieHorúčka denguenečistotami svojej vysokej citlivosti a špecifickosti. Táto metóda je však drahá, namáhavá a náchylná na falošnú pozitivitu, ktorú musí vykonávať vyškolený personál.Na prekonanie nevýhod týchto metód bola použitá nová metóda detekcieultrasenzitívna ELISA je aplikované v tejto štúdii.

3. Pracovný postup ultracitlivého testu ELISA s cyklovaním tio-NAD

Pár protilátokJepoužíva sa na zachytávanie proteínu NS1 v sendviči ELISA a alkalickej fosfatázyJeoznačené na sekundárnej protilátke. Okrem protilátok je to derivát androsterónu, 3α-hydroxysteroid dehydrogenáza, tio-NAD a NADHsúpoužíva sa na konštrukciu cyklického systému enzýmov tio-NAD. Počas cyklickej reakcie tio-NAD sa tio-NADH neustále hromadil v trojuholníkovom čísle a mohol sa priamo merať pri absorbancii 405 nm.

4. Porovnanie ultrasenzitívnej ELISA a NAAT pri detekcii proteínu Dengue NS1

V NAAT je 60 vzoriek pozitívnych na horúčku dengue a 25 negatívnych na horúčku dengue. Hodnota prahu cyklu NAAT (CT) týchto vzoriek pozitívnych na horúčku dengue sa pohybovala od 12,42 do 31,41.V ultrasenzitívnej ELISA je 59 vzoriek zodpovedajúcim výsledkom NAAT, zatiaľ čo 25 vzoriek je úplne zodpovedajúcich výsledkom NAAT.

V porovnaní s NAAT je senzitivita a špecificita ultrasenzitívneho testu ELISA 98,3 % a špecificita 100 % (tabuľka 2). Zo 60 vzoriek pacientov pozitívnych na horúčku dengue potvrdených NAAT je iba 1 vzorka negatívna v ultrasenzitívnej ELISA. Údaje NAAT ukázali, že vzorka je prípadom infekcie DENV typu 4 s hodnotou CT 21,59. Výsledky ultrasenzitívnej skúšky ELISA sú takmer v dokonalej zhode s výsledkami NAAT s hodnotou kappa 0,972 (95 % CI: 0,917-1.0).

5. Záver

Ultracitlivá metóda ELISA sa ľahko vykonáva a nevyžaduje žiadnych profesionálnych cvičencov. Detekciu je možné spustiť ihneď po prijatí malej vzorky. Je vhodný najmä na včasné odhalenie ochorenia dengue v krajinách s nízkymi príjmami.

Referencia

Chen, Po-Kai a kol. "Pokročilá metóda detekcie proteínu NS1 dengue pomocou ultracitlivej ELISA s cyklom tio-NAD." Vírusy, zv. 15,9, 1894. 8. septembra 2023, doi:10.3390/v15091894

Výhody a vlastnosti produktuBONTAC Thio-NAD/S-NAD

BONTAC je oJeden z mála podnikov vČínaktorý dokáže produkovať Thio-NADs"Bonzyme"Celoenzymatická metóda(šetrné k životnému prostrediu;žiadne škodlivé zvyšky rozpúšťadiel) a jedinečná sedemstupňová technológia čistenia "Bonpure". BONTAC spája výskum a vývoj, výrobu a predaj s vlastných tovární a množstvo medzinárodných certifikácií na zabezpečenie vysokej kvality a stabilných dodávok výrobkov.

Vyhlásenie

Spoločnosť BONTAC nenesie žiadnu zodpovednosť za akékoľvek nároky vyplývajúce priamo alebo nepriamo z vášho spoliehania sa na informácie a materiály na tejto webovej stránke.