Detekcia horúčky dengue NS1 pomocou ultrasenzitívnej testy ELISA pomocou cyklistiky Thio-NAD

1. Úvod

Horúčka dengue je akútne infekčné ochorenie spôsobenéVírus dengueuhryznutím infikovaného komára druhu Aedes (Ae. aegypti alebo Ae. albopictus),s hlavnými príznakmi, ako je vysoká horúčka, závraty, bolesti hlavy, vyrážky aSilná bolesti (bolesť očí, svalov, kĺbov alebo kostí) atď. Toto ochorenie je široko rozšírené v tropickom a subtropickom podnebí. Odhaduje sa, že každý rok sa nakazí 100 až 400 miliónov ľudí, pričom viac ako 80% je zvyčajne miernych a asymptomatických. Závažná horúčka dengue však môže zvýšiť riziko úmrtia, ak sa nelieči správne. Včasná diagnostika tejto choroby je teda významná pre jej včasnú liečbu.

Je pozoruhodné, že neštrukturálny proteín 1 (NS1), vysoko konzervovaný glykoproteín, sa vylučuje hlavne počas infekcieDenguevírus, ktorý sa intenzívne považuje za hlavný faktor patogenézyHorúčka dengue. Preto sa NSI všeobecne používa ako biomarker na včasnú detekciu tejto choroby.

V tejto štúdii sa použil imunosorbentný test viazaný na sendvičový enzým(ELISA) v kombinácii stionikotínamid adenín dinukleotid (tio-NAD/S-NAD)Metóda cyklistiky ( ďalej len ultrasenzitívna testovacia test ELISA ) sa používa na detekciu NSI, po ktorom nasleduje porovnanie s NAAT na potvrdenie presnosti jeho detekcie.

2. Výhody a nevýhody tradičných detekčných metód preHorúčka dengue 

V súčasnosti tTu sú štyri hlavné metódy detekcieza Horúčka dengue.


Izolácia vírusu a identifikácia majú vysokú špecifickosť, ale sú časovo náročné a trvajú najmenej 5 dní. Tá rýchly antigén Test je najrýchlejší a nákladovo najefektívnejší spomedzi ostatných metód, ale citlivosť a špecifickosť sú relatívne nízke. Sérologický test založený na IgM a IgG je obmedzený počet dní infekcie, akotátest sa musí odložiť dovtedy, kým hladina protilátok stúpa na zistiteľnú úroveň.

Na klinike sa NAAT často používa na určenieHorúčka dengue nečistotami svojej vysokej citlivosti a špecifickosti. Táto metóda je však drahá, pracná a náchylná na falošnú pozitivitu, ktorú musí vykonávať vyškolený personál.Na prekonanie nevýhod týchto metód je potrebná nová metóda detekcieultrasenzitívny test ELISA je aplikované v tejto štúdii.

3. Pracovný postup ultrasenzitívneho testu ELISA s cyklistikou tio-NAD

Pár protilátokJepoužíva sa na zachytenie proteínu NS1 v sendviči ELISA a alkalickej fosfatázyJeoznačené na sekundárnej protilátke. Okrem protilátok, derivátu androsterónu, 3a-hydroxysteroiddehydrogenázy, tio-NAD a NADHsúpoužíva sa na konštrukciu systému cyklovania enzýmov tio-NAD. Počas cyklickej reakcie tio-NAD sa tio-NADH neustále akumuloval trojuholníkovým číselným spôsobom a mohol byť priamo meraný pri absorbancii 405 nm.

4. Porovnanie ultrasenzitívnych testov ELISA a NAAT pri detekcii proteínu dengue NS1

V NAAT je 60 vzoriek pozitívnych na horúčku dengue a 25 je negatívnych na horúčku dengue. Prahová hodnota cyklov NAAT (CT) týchto vzoriek pozitívnych na horúčku dengue sa pohybovala od 12,42 do 31,41.V ultrasenzitívnom teste ELISA je 59 vzoriek zodpovedajúcim spôsobom pozitívnych na výsledky NAAT, zatiaľ čo 25 vzoriek je úplne zodpovedajúcich výsledkom NAAT.

V porovnaní s NAAT je citlivosť ultrasenzitívneho testu ELISA 98,3 % a špecifickosť 100 % (tabuľka 2). Zo 60 vzoriek pacientov s pozitívnou horúčkou dengue potvrdených NAAT je iba 1 vzorka negatívna v ultrasenzitívnom teste ELISA. Údaje NAAT ukázali, že vzorka je prípadom infekcie DENV typu 4 s hodnotou CT 21,59. Výsledky ultrasenzitívnej analýzy ELISA sú takmer v dokonalej zhode s výsledkami NAAT s hodnotou kappa 0,972 (95 % IS: 0,917-1.0).

5. Záver

Ultrasenzitívna metóda ELISA sa ľahko vykonáva a nevyžaduje obsluhu žiadnych profesionálnych praktikantov. TDetekciu je možné začať ihneď po prijatí malej vzorky.Je obzvlášť vhodný na včasné odhalenieDengueochorenie ukrajiny s nízkymi príjmami.

Referencia

Chen, Po-Kai et al. "Pokročilá metóda detekcie proteínu dengue NS1 pomocou ultrasenzitívnej ELISA s cyklom tio-NAD." Vírusy, zv. 15,9, 1894. 8. septembra 2023, doi:10.3390 / v15091894

Výhody produktu a vlastnostiBONTAC Thio-NAD/S-NAD

BONTAC  je oNE z mála podnikov vČínaktoré môžu produkovať Thio-NADs"Bonzyme" Celoenzymatická metóda (šetrné k životnému prostrediu;žiadne škodlivé zvyšky rozpúšťadiel) a jedinečná sedemstupňová technológia čistenia "Bonpure". BONTAC spája výskum a vývoj, výrobu a predaj s vlastné továrne a množstvo medzinárodných certifikácií na zabezpečenie vysokej kvality a stabilných dodávok výrobkov.

 

Vyhlásenie

BONTAC nenesie žiadnu zodpovednosť za akékoľvek nároky vyplývajúce priamo alebo nepriamo z vášho spoliehania sa na informácie a materiály na tejto webovej stránke.