Vedecká metóda na kvantifikáciu NMN v biologických vzorkách
1. Úvod
Doplnenie nikotínamid mononukleotid (NMN) na zvýšenie hladiny nikotínamid adenín dinukleotidu (NAD +) bolo odhalené ako sľubná intervencia proti starnutiu. Presná kvantifikácia medziproduktov NAD + je však stále vážnou výzvou, NMN obzvlášť. Táto štúdia má za cieľ zaviesť novú metódu, metodiku LC-MS/MS sprostredkovanú dvojitým izotopom (dimeLC-MS/MS), na presnú kvantifikáciu NMN v biologických vzorkách.
2. Faktory ovplyvňujúce presnú detekciu NMN
NMN je ťažké presne zistiť kvôli jeho zraniteľnosti voči enzymatickej degradácii, konverzii pri spracovaní vzoriek, jeho zložitému správaniu v rôznych podmienkach kolóny a extrakcie, ako aj matrixovému efektu.
Konkrétne má NMN vlastnosti vysokej polarity a nízkej prchavosti, ktorá sa ľahko rozpúšťa vo vode, ale ťažko sa rozpúšťa v organických rozpúšťadlách. Tieto vlastnosti výrazne obmedzujú aplikáciu mnohých konvenčných metód kvantitatívnej analýzy.
BIologické vzorky napríkladkrv nesie významné aktivity CD38 a CD73 (ecto-5’-nukleotidáza), z ktorých obe by mohli používať NMN ako substrát.
Správanie NMN v kolóne je veľmi zložité, pravdepodobne kvôli bipartitnej povahe jeho nábojov, takže jemné rozdiely v podmienkach extrakcie a kolóny významne ovplyvňujú spoľahlivú a presnú detekciu NMN.
3. Stratégie zvládania dimeLC-MS/MSznížiť vplyv faktorov vplyvu
Aby sa predišlo rušeniu vyššie uvedených faktorov, používa sa prototyp stĺpca NMN-2. Táto kolóna obsahuje vysoko čisté častice oxidu kremičitého na báze C18, ktoré sú schopnejšie viazať hydrofilné zlúčeniny ako častice uhlíka, čím sa zlepšuje schopnosť separácie.
Používa sa kyselina chloristá (PCA), pretože dokáže efektívne extrahovať NAD + a NMN z biologických vzoriek, ako je plazma, s minimálnymi stratami.
Na úpravu efektov matrice sa do biologických vzoriek pred extrakciou PCA pridá pevné množstvo (1 μM) každej izotopovej zlúčeniny.
4. Výhodasz dimeLC-MS/MS
Dvojité izotopové štandardy NMN, NMN (M + 14) a NMN (M + 5), v metodike riadenej LC-MS/MS dokážu presne sledovať osud NMN počas spracovania vzoriek, čo výrazne zvyšuje presnosť a spoľahlivosť merania NMN v biologických vzorkách. Okrem toho dimeLC-MS/MS dokáže vyhodnotiť účinnosť extrakcie a absolútne koncentrácie NMN v rôznych typoch biologických vzoriek.
5. Záver
ThJenový LC-MS/MS-metodika riadená dvojitými izotopovými štandardmi NMN dokáže presne a spoľahlivo merať NMN v biologických vzorkách.Môže sa použiť pre budúce štúdie o príjme NMN.
6. Referencie
Unno, Junya a kol. "Absolútna kvantifikácia nikotínamidového mononukleotidu v biologických vzorkách dvojitou izotopovou kvapalinovou chromatografiou-tandemovou hmotnostnou spektrometriou (dimeLC-MS/MS)." npj starnutie, zv. 10,1 2. 2. januára 2024, doi:10.1038/s41514-023-00133-1
Prečo si vybrať BONTAC?
BONTAC je lídrom globálneho NMN priemysel. Máme prvú technológiu celoenzýmovej katalýzy v Číne a stali sme sa popredným podnikom v oblasti koenzýmových produktov, ktoré sú široko používané v zdravotníctve, medicíne a kráse, zelenom poľnohospodárstve, biomedicíne a ďalších oblastiach. Je pozoruhodné, že BONTAC je NMN dodávateľ surovín slávneho tímu Davida Sinclaira na Harvardskej univerzite. Naše služby a produkty sú dôveryhodné. Navyše BONTAC má nezávislé výskumné centrum technológie koenzýmového inžinierstva na provinčnej úrovni v Číne a vlastné továrne, kde je možné zabezpečiť čistotu a stabilitu produktov.
Vyhlásenie
ThJe Článok jeZáklade odkaz vakademický časopis. Relevantné informácie sú poskytnúť len na účely zdieľania a vzdelávania a nepredstavuje žiadne účely lekárskeho poradenstva. Ak dôjde k porušeniu, prosím, kontaktAutor zaVymazaťión. Názory vyjadrené v tomto článku nereprezentujú stanovisko BONTAC.