Vedecká metóda kvantifikácie NMN v biologických vzorkách
1. Úvod
Dopĺňanienikotínamid mononukleotid (NMN)na zvýšenie hladiny nikotínamid adenín dinukleotidu (NAD +) sa ukázalo ako sľubná intervencia proti starnutiu. Stále je však vážnou výzvou presne kvantifikovať medziprodukty NAD +,NMNobzvlášť. Táto štúdia je zameraná na zavedenie novej metódy, metodiky LC-MS/MS sprostredkovanej dvojitým izotopom (dimeLC-MS/MS), na presnú kvantifikáciuNMNv biologických vzorkách.
2. Faktory ovplyvňujúce presnú detekciu NMN
NMN je ťažké presne zistiť kvôli jeho zraniteľnosti voči enzymatickej degradácii, konverzii pri spracovaní vzorky, jeho komplexnému správaniu v rôznych podmienkach kolóny a extrakcie, ako aj matricovému efektu.
Konkrétne má NMN vlastnosti vysokej polarity a nízkej prchavosti, ktorá sa ľahko rozpúšťa vo vode, ale ťažko sa rozpúšťa v organických rozpúšťadlách. Tieto vlastnosti výrazne obmedzujú aplikáciu mnohých konvenčných metód kvantitatívnej analýzy.
Bjologické vzorkynapríkladkrv nesie významnú aktivitu CD38 a CD73 (ecto-5’-nukleotidáza), ktoré by mohli používať NMN ako substrát.
Správanie NMN v kolóne je veľmi zložité, pravdepodobne kvôli bipartitnej povahe jeho nábojov, takže jemné rozdiely v extrakcii a podmienkach kolóny významne ovplyvňujú spoľahlivú a presnú detekciu NMN.
3. Stratégie zvládaniadimeLC-MS/MSznížiť vplyv impakt faktorov
Aby sa predišlo interferencii vyššie uvedených faktorov, použije sa prototyp stĺpca NMN-2. Táto kolóna obsahuje vysoko čisté častice oxidu kremičitého na báze C18, ktoré sú schopnejšie viazať hydrofilné zlúčeniny ako častice uhlíka, čím sa zlepšuje schopnosť separácie.
Používa sa kyselina chloristá (PCA), pretože dokáže efektívne extrahovať NAD+ a NMN z biologických vzoriek, ako je plazma, s minimálnymi stratami.
Na úpravu účinkov matrice sa do biologických vzoriek pred extrakciou PCA pridá pevné množstvo (1 μM) každej izotopovej zlúčeniny.
4. VýhodasdimeLC-MS/MS
Dvojité izotopové štandardy NMN, NMN (M + 14) a NMN (M + 5), v metodike riadenej LC-MS/MS dokážu presne sledovať osud NMN počas spracovania vzorky, čo výrazne zvyšuje presnosť a spoľahlivosť merania NMN v biologických vzorkách. Okrem toho dimeLC-MS/MS dokáže vyhodnotiť účinnosť extrakcie a absolútne koncentrácie NMN v rôznych typoch biologických vzoriek.
5. Záver
ŠtJenový LC-MS/MS-Metodika založená na dvojitých izotopových štandardoch NMN dokáže presne a spoľahlivo merať NMN v biologických vzorkách.Môže sa použiť pre budúce štúdie o príjme NMN.
6. Referencie
Unno, Junya a kol. "Absolútna kvantifikácia nikotínamid mononukleotidu v biologických vzorkách pomocou kvapalinovej chromatografie sprostredkovanej dvojitým izotopom-tandemovou hmotnostnou spektrometriou (dimeLC-MS/MS)." npj starnutie zv. 10,1 2. 2. januára 2024, doi:10.1038/s41514-023-00133-1
Prečo si vybraťBONTAC?
BONTACje lídrom globálnehoNMNpriemysel. Máme prvú technológiu katalýzy celého enzýmu v Číne a stali sme sa popredným podnikom v oblasti koenzýmových produktov, ktoré sú široko používané v zdravotníctve, medicíne a kráse, zelenom poľnohospodárstve, biomedicíne a ďalších oblastiach. Je pozoruhodné, že BONTAC je NMNdodávateľ surovín slávneho tímu Davida Sinclaira na Harvardskej univerzite. Naše služby a produkty sú dôveryhodné. NavyšeBONTACmá nezávislé výskumné centrum technológie koenzýmového inžinierstva na provinčnej úrovni v Číne a továrne vo vlastnom vlastníctve, kde je možné zabezpečiť čistotu a stabilitu produktov.
Vyhlásenie
ŠtJeČlánok jeZáklade odkaz vAkademický časopis. Relevantné informácie súposkytnúťLen na účely zdieľania a vzdelávania a nepredstavuje žiadne lekárske poradenstvo. Ak dôjde k akémukoľvek porušeniu, prosím,kontaktAutorzaOdstrániťión. Názory vyjadrené v tomto článku nereprezentujú stanoviskoBONTAC.