Mimoriadne výhody ultrasenzitívnej ELISA s cyklovaním thio-NAD pri určovaní dengue NS1 proteínu
1. Úvod
Horúčka dengue je akútne infekčné ochorenie spôsobenéVírus dengue uhryznutím infikovaného druhu Aedes (Ae. aegypti alebo Ae. albopictus) komára,s hlavnými príznakmi ako vysoká horúčka, závraty, bolesť hlavy, vyrážka aSilná bolesti (bolesť očí, svalov, kĺbov alebo kostí) a podobne. Táto choroba je rozšírená v tropických a subtropických oblastiach. Odhaduje sa, že každý rok je infikovaných 100 až 400 miliónov ľudí, pričom viac ako 80 % je zvyčajne miernych a bez príznakov. Napriek tomu môže ťažká horúčka dengue zvýšiť riziko úmrtia, ak sa nelieči správne. Preto je včasná diagnostika tejto choroby dôležitá pre jej včasnú liečbu.Pozoruhodné je, že neštrukturálny proteín 1 (NS1), vysoko konzervovaný glykoproteín, sa počas infekcie prevažne vylučujeDengueVírus, ktorý je intenzívne považovaný za hlavný patogenézny faktorHorúčka dengue. Preto sa NSI všeobecne používa ako biomarker na včasné odhalenie tohto ochorenia.
V tejto štúdii bol použitý imunosorbentný test viazaný na sendvičové enzýmy (ELISA) v kombinácii sThio nikotinamid adenín dinukleotid (thio-NAD/S-NAD)Metóda cyklovania (ďalej nazývané ultracitlivá ELISA) sa využíva na detekciu NSI, po ktorej nasleduje porovnanie s NAAT na potvrdenie jeho správnosti detekcie.
2. Výhody a nevýhody tradičných metód detekcie preHorúčka dengue
V súčasnosti je tTu sú štyri hlavné detekčné metódypre Horúčka dengue.
Izolácia vírusu a identifikácia má vysokú špecificitu, ale je časovo náročná a trvá aspoň 5 dní. The Rýchly antigén Test je najrýchlejší a najnákladovo najefektívnejší spomedzi ostatných metód, ale citlivosť a špecifickosť je relatívne nízka. Sérologický test založený na IgM a IgG je obmedzený počet dní infekcie, akotheTest musí byť odložený až do dosiahnutia hladiny protilátok stúpa na zistiteľnú úroveň.
V klinike sa často používa NAAT na určenieHorúčka dengue nečistôt s vysokou citlivosťou a špecificitou. Táto metóda je však drahá, zdĺhavá a náchylná na falošnú pozitívnosť, ktorú musia vykonávať vyškolení pracovníci.Na prekonanie nevýhod týchto metód je použitá nová detekčná metódaultracitlivá ELISA je aplikované v tejto štúdii.
3. Pracovný postup ultrasenzitívnej ELISA s cyklovaním thio-NAD
Dvojica protilátokje používa sa na zachytenie proteínu NS1 v sendvičovej ELISA a alkalickej fosfatázyje označené na sekundárnej protilátke. Okrem protilátok existuje androsterónový derivát, 3α-hydroxysteroid dehydrogenáza, thio-NAD a NADHsú používa sa na konštrukciu systému cyklovania tio-NAD enzýmov. Počas cyklickej reakcie thio-NAD sa thio-NADH neustále hromadil v trojuholníkovom čísle a mohol byť priamo meraný pri absorpcii 405 nm.
4. Porovnanie ultrasenzitívnej ELISA a NAAT pri detekcii proteínu Dengue NS1
V NAAT je 60 exemplárov pozitívnych na dengue a 25 na dengue negatívnych. Hodnota NAAT cyklického prahu (CT) týchto dengue pozitívnych exemplárov sa pohybovala od 12,42 do 31,41.V ultrasenzitívnom ELISA je 59 vzoriek zodpovedajúcich pozitívnym výsledkom NAAT, zatiaľ čo 25 vzoriek je úplne negatívnych voči výsledkom NAAT.V porovnaní s NAAT je citlivosť a špecificita ultrasenzitívnej ELISA 98,3 % a 100 % (Tabuľka 2). Zo 60 pacientov pozitívnych na dengue potvrdených NAAT je len jedna vzorka negatívna v ultrasenzitívnom ELISA. Údaje NAAT ukázali, že vzorka je typ 4 DENV infekcie s CT hodnotou 21,59. Výsledky ultrasenzitívnej ELISA sú takmer v dokonalej zhode s výsledkami NAAT, s hodnotou kappa 0,972 (95% CI: 0,917-1.0).
5. Záver
UMetóda ltrasensitívneho ELISA je jednoduchá na vykonanie a na operáciu nevyžaduje žiadnych profesionálnych školencov. THE detekcia môže začať okamžite po prijatí malej vzorky. Je obzvlášť vhodná na včasné odhalenieDenguechoroba v Krajiny s nízkym príjmom.Referencie
Chen, Po-Kai a kol. "Pokročilá metóda detekcie dengue NS1 proteínu pomocou ultrasenzitívnej ELISA s cyklovaním Thio-NAD." Vírusy, zv. 15,9, 1894. 8. september 2023, doi:10.3390/v15091894Výhody a vlastnosti produktuBONTAC Thio-NAD/S-NAD
BONTAC je one z mála podnikov vČína ktorý dokáže produkovať Thio-NAD, s"Bonzyme" Celoenenzymatická metóda (Šetrné k životnému prostrediu; Žiadne škodlivé zvyšky rozpúšťadiel) a jedinečná "Bonpure" sedemstupňová technológia čistenia. BONTAC spája výskum a vývoj, výrobu a predaj s vlastné továrne a množstvo medzinárodných certifikácií na zabezpečenie vysokej kvality a stabilného dodávok produktov.
