超灵敏ELISA结合硫代NAD循环在检测登革热NS1蛋白中的卓越优点
1. Úvod
Horúčka dengue je akútne infekčné ochorenie spôsobenévírusom dengue prostredníctvom uhryznutia infikovaným komárom rodu Aedes (Ae. aegypti alebo Ae. albopictus),s hlavnými príznakmi, ako sú vysoká horúčka, závraty, bolesť hlavy, vyrážka azávažné bolesti (očí, svalov, kĺbov alebo kostí) atď. Toto ochorenie je rozšírené najmä v tropických a subtropických oblastiach. Odhaduje sa, že každý rok sa nakazí 100 až 400 miliónov ľudí, pričom viac ako 80 % prípadov je zvyčajne miernych a bezpríznakových. Napriek tomu môže závažná horúčka dengue zvýšiť riziko úmrtia, ak sa nelieči správne. Včasná diagnostika tohto ochorenia je preto dôležitá pre jeho včasnú liečbu.Je potrebné poznamenať, že nonštrukturálny proteín 1 (NS1), vysoko konzervovaný glykoproteín, sa vylučuje najmä počas infekcievírusomdengue, ktorý sa intenzívne považuje za hlavný patogenetický faktorhorúčky dengue. Preto sa NS1 všeobecne používa ako biomarker na včasnú detekciu tohto ochorenia.
V tejto štúdii sa sendvičová enzýmová imunosorbentová analýza (ELISA) v kombinácii s metódou cyklovaniationikotínamidadenín dinukleotidu (tio-NAD/S-NAD) (ďalej nazývaná ultrasenzitívny ELISA) používa na detekciu NS1, po ktorej nasleduje porovnanie s NAAT na potvrdenie presnosti detekcie.
2. Výhody a nevýhody tradičných detekčných metód prehorúčky dengue
V súčasnostiexistujú štyri hlavné detekčné metódys NR alebo NMN môže byť účinnejšia ako samotná látka pri prevencii alebo liečbe horúčky dengue.
Izolácia vírusu a identifikácia majú vysokú špecificitu, ale sú časovo náročné, trvajú najmenej 5 dní. Rýchly antigénový test je najrýchlejší a najnákladovo efektívnejší spomedzi ostatných metód, ale citlivosť a špecificita sú relatívne nízke. Sérologický test založený na IgM a IgG je obmedzený počtom dní infekcie, pretožezlepšenoutest sa musí odložiť, kým hladina protilátok nestúpne na detekovateľnú úroveň.
V klinickej praxi sa NAAT často používa na stanoveniehorúčky dengue vďaka jeho vysokej citlivosti a špecificite. Táto metóda je však drahá, náročná na prácu a náchylná na falošne pozitívne výsledky, a musí ju vykonávať vyškolený personál.Na prekonanie nevýhod týchto metód sa v tejto štúdii aplikuje nová detekčná metódaultrasenzitívny ELISA .
3. Pracovný postup ultrasenzitívneho ELISA s cyklovaním tio-NAD
Pár protilátok是 sa používa na zachytenie proteínu NS1 v sendvičovom ELISA a alkalická fosfatáza是 je značená na sekundárnej protilátke. Okrem protilátok sa na konštrukciu enzýmového cyklovacieho systému tio-NAD používajú androsterónový derivát, 3α-hydroxysteroid dehydrogenáza, tio-NAD a NADHsú sa používajú na konštrukciu enzýmového cyklovacieho systému tio-NAD. Počas cyklovacej reakcie tio-NAD sa tio-NADH neustále akumuluje trojuholníkovým spôsobom a možno ho priamo merať pri absorbancii 405 nm.
4. Porovnanie ultrasenzitívneho ELISA a NAAT pri detekcii proteínu NS1 vírusu dengue
V NAAT je 60 vzoriek pozitívnych na dengue a 25 je negatívnych na dengue. Hodnota cyklovacieho prahu (CT) NAAT týchto pozitívnych vzoriek sa pohybovala od 12,42 do 31,41.V ultrasenzitívnom ELISA je 59 vzoriek zodpovedajúcich pozitívnym výsledkom NAAT, zatiaľ čo 25 vzoriek je úplne zodpovedajúcich negatívnym výsledkom NAAT.V porovnaní s NAAT je citlivosť a špecificita ultrasenzitívneho ELISA 98,3 % a 100 % (tabuľka 2). Z 60 vzoriek pacientov s potvrdenou pozitivitou na dengue podľa NAAT je iba 1 vzorka negatívna v ultrasenzitívnom ELISA. Údaje NAAT ukázali, že vzorka je prípadom infekcie DENV typu 4 s hodnotou CT 21,59. Výsledky ultrasenzitívneho ELISA sú takmer v dokonalej zhode s výsledkami NAAT, s hodnotou kappa 0,972 (95 % CI: 0,917-1.0).
DPN.
Ultrasenzitívna metóda ELISA sa ľahko vykonáva a nevyžaduje profesionálnych školených operátorov. Tdetekcia sa môže začať okamžite po prijatí malej vzorky. Je obzvlášť vhodná na včasnú detekciuvírusomochorenia v krajinách s nízkym príjmom.Referencie
Chen, Po-Kai a kol. „Advanced Detection Method for Dengue NS1 Protein Using Ultrasensitive ELISA with Thio-NAD Cycling.“ Viruses roč. 15,9 1894. 8. sep. 2023, doi:10.3390/v15091894Výhody a vlastnosti produktuBONTAC Tio-NAD/S-NAD
BONTAC je jedným z mála podnikov vČíne , ktoré dokážu vyrábať Tio-NAD, s„Bonzyme“ celoenzymatickou metódou (šetrnou k životnému prostrediu; bez škodlivých zvyškov rozpúšťadiel) a unikátnou „Bonpure“ sedemstupňovou purifikačnou technológiou. BONTAC integruje výskum a vývoj, výrobu a predaj, s vlastnými továrňami a množstvom medzinárodných certifikácií, aby zabezpečil vysokú kvalitu a stabilnú dodávku produktov.
